Búsqueda de oligopéptidos quelantes de Hierro usando una biblioteca aleatoria de Plásmidos construida en Sccharomyces cerevisiae

Abstract

Saccharomyces cerevisiae es un organismo modelo ampliamente utilizado debido a su facilidad de manipulación genética y su capacidad para integrar fragmentos grandes de ADN, además de construir plásmidos libres de errores mediante recombinación homóloga. En este estudio, se aprovechó esta capacidad para desarrollar una biblioteca de plásmidos destinada a la producción de oligopéptidos aleatorios. Se aplicaron una estrategia de clonación in vivo en S. cerevisiae para la construcción de la biblioteca de plásmidos, y un ensayo de coloración que permite la identificación de los oligopéptidos que se asocian con hierro. El ensayo de coloración utilizó ferrocianuro de potasio, que reacciona con el ión férrico para formar un pigmento de color azul intenso, conocido como azul de Prusia. Este ensayo permitió identificar a los transformantes de levadura que al producir un oligopèptido quelante, acumulan mayores cantidades del metal. Con este procedimiento se logró identificar dos oligopéptidos con potencial actividad quelante de hierro.

Saccharomyces cerevisiae is a widely used model organism due to its ease of genetic manipulation and its ability to integrate large DNA fragments, as well as to construct errorfree plasmids through homologous recombination. In this study, this ability was exploited to develop a plasmid library that allowed the production of random oligopeptides. An in vivo cloning strategy in S. cerevisiae was applied for the construction of the plasmid library and additionally, a staining assay was implemented for the identification of the iron-binding oligopeptides. The staining assay used potassium ferrocyanide, which reacts with ferric ions to form an intense blue pigment, known as Prussian blue. This assay allowed the identification of yeast transformants that, by producing a chelating oligopeptide, accumulate greater amounts of the metal. With this procedure, two oligopeptides with potential iron chelating activity were identified.