Tamizado genético para la identificación de oligopéptidos de secuencias semialeatorias que confieren resistencia a Hierro en Saccharomyces cerevisiae

Abstract

La alta prevalencia de anemia a nivel mundial en infantes, mujeres embarazadas y mujeres en edad fértil; así como la falta de suplementos con alta biodisponibilidad de hierro ha conducido a la búsqueda de alternativas de suplementación. En este sentido, la levadura Saccharomyces cerevisiae es una candidata atractiva debido a su uso extendido como suplemento nutricional, por su elevado contenido de vitaminas del complejo B. Sin embargo, para incrementar el contenido de hierro en las células de levadura, es esencial incrementar simultáneamente su resistencia al metal. Este trabajo tiene como objetivo identificar oligopéptidos que confieren resistencia a hierro, mediante el tamizado de una biblioteca de plásmidos que permite la síntesis de oligopéptidos semialeatorios. Para la construcción de la biblioteca, los oligonucleótidos semialeatorios fueron obtenidos por PCR, y posteriormente fueron clonados en el plásmido p416GPD en la cepa de levadura sensible a hierro Δccc1, usando la estrategia de clonación in vivo. Las colonias resistentes de transformantes de levadura fueron seleccionadas mediante siembra en medio sólido que contenía cloruro de hierro. Se seleccionaron las colonias más resistentes para la extracción de plásmidos, purificación y análisis de secuencia de nucleótidos. Se dedujeron las secuencias de aminoácidos de cada uno de los oligopéptidos codificados y su comparación permitió identificar una secuencia consenso, que potencialmente podría promover una mayor especificidad en la formación del complejo péptido-hierro.