Desarrollo de un método de inactivación temprana de Mycobacterium tuberculosis en muestras de esputo

Abstract

La tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada por Mycobacterium tuberculosis (MTB) que se distribuye ampliamente en todo el mundo. Se desarrolló un método de inactivación de MTB en muestras de esputo para su uso en pruebas moleculares en laboratorios de bajo riesgo facilitando la manipulación de muestras y la descentralización de pruebas moleculares. Se seleccionaron esputos que fueron divididos en dos partes: una fue analizada por proceso rutinario mediante el método molecular para detección de resistencia a drogas antituberculosis de primera línea, el Ensayo de Sonda en Línea (ESL); mientras que la otra fue utilizada para evaluar los métodos de inactivación. Se probaron cuatro métodos a temperatura ambiente (1) Hidróxido de Sodio + Isopropanol, (2) Hipoclorito de Sodio, (3) Hidróxido de Sodio, (4) Isopropanol; modificando las concentraciones (molaridad [M]) y tiempos de exposición (5, 10, 15 y 20 minutos). Se denominó “tratamiento” a cada una de las condiciones específicas de inactivación. La eficacia de inactivación se determinó a través de la viabilidad del crecimiento de MTB en medio Löwenstein-Jensen. La compatibilidad entre tratamiento de inactivación, y el ESL, se realizó evaluando la concordancia de resultados del proceso rutinario frente a los del método de inactivación seleccionado. De las muestras ingresadas al estudio, se obtuvieron 622 alícuotas de un mínimo de volumen de 1 mL. Los tratamientos con alta concentración de Isopropanol (8M y 10M), Hipoclorito de Sodio (2.5 por ciento y 3 por ciento), y Hidróxido de Sodio (4M) tuvieron inactivación efectiva sin crecimiento de MTB. Sin embargo, se seleccionó el tratamiento a base de Isopropanol para su evaluación en conjunto con la prueba molecular de ESL, con una concordancia del 100 por ciento entre los resultados de rutina y del método de inactivación. El tratamiento a base de Isopropanol 8M por 15 minutos, inactivó eficazmente a MTB a partir de muestras de esputo y es compatible con la prueba molecular de ESL.

Tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis (MTB) that is widely distributed throughout the world. A method for inactivating MTB in sputum samples was developed for use in molecular testing in low-risk laboratories, facilitating sample handling and the decentralization of molecular testing. Sputum samples were selected and divided into two parts: one part was analyzed using the routine molecular method for detecting resistance to first-line anti-tuberculosis drugs, the Line Probe Assay (LPA); while the other part was used to evaluate the inactivation methods. Four methods were tested at room temperature: (1) Sodium Hydroxide + Isopropanol, (2) Sodium Hypochlorite, (3) Sodium Hydroxide, and (4) Isopropanol, modifying the concentrations (molarity [M]) and exposure times (5, 10, 15, and 20 minutes). Each specific inactivation condition was referred to as a “treatment.” The effectiveness of inactivation was determined by the viability of MTB growth in Löwenstein-Jensen medium. The compatibility between the inactivation treatment and the LPA was assessed by evaluating the concordance of the results of the routine process with those of the selected inactivation method. From the samples entered into the study, 622 aliquots with a minimum volume of 1 mL were obtained. Treatments with high concentrations of Isopropanol (8M and 10M), Sodium Hypochlorite (2.5 percent and 3 percent), and Sodium Hydroxide (4N) had effective inactivation without MTB growth. However, the Isopropanol-based treatment was selected for evaluation in conjunction with the LPA molecular test, with 100 percent concordance between routine results and the inactivation method. The 8M Isopropanol treatment for 15 minutes effectively inactivated MTB from sputum samples and is compatible with the LPA molecular test.