Clonación en Saccharomyces cerevisiae y análisis bioinformático de los ADNs complementarios del virus de la tilapia lacustre (TiLV)

Abstract

La clonación y expresión de proteínas en sistemas heterólogos son herramientas muy útiles para el estudio de proteínas virales. En este trabajo, una estrategia de clonación in vivo fue aplicada usando la levadura Saccharomyces cerevisiae como un método eficiente y económico para clonar los ADNs complementarios (ADNc) del virus de la tilapia lacustre (TiLV). Este virus está asociado a mortalidades masivas de tilapia Oreochromis niloticus alrededor del mundo, incluyendo Perú. Los ADNc sintetizados a partir del ARN extraido de los especímenes infectados permitió la clonación de todos los segmentos virales, con altas eficiencias. Además, el análisis bioinformático de las secuencias permitió establecer una relación filogenética con gran homología con otra cepa previamente reportada en Ecuador y causante de brotes de hepatitis sincitial desde 2012.Cloning and protein expression in heterologous systems are very useful tools for the study of viral proteins. In this work, an in vivo cloning strategy was applied using the budding yeast Saccharomyces cerevisiae, as an efficient and low-cost method to clone the complementary DNAs (cDNAs) from the Tilapia Lake Virus (TiLV), which is associated to worldwide massive mortalities of tilapia Oreochromis niloticus including Peru. Complementary DNAs synthetized from infected fish tissues allowed the cloning of all the viral segments with high efficiencies; while the bioinformatic analysis allowed the elucidation of a close phylogenetic relationship with a previously reported Ecuadorian strain responsible of syncytial hepatitis outbreaks since 2012.