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dc.contributor.advisorVillena Chávez, Gretty Katherina
dc.contributor.authorLara Zuñiga, Jorge Luis
dc.date.accessioned2021-05-26T16:26:34Z
dc.date.available2021-05-26T16:26:34Z
dc.date.issued2021
dc.identifier.urihttp://repositorio.lamolina.edu.pe/handle/UNALM/4722
dc.descriptionUniversidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Ciencias. Departamento Académico de Biologíaes_PE
dc.description.abstractEn el presente trabajo se evaluaron dos procedimientos de transformación genética en Aspergillus niger, un procedimiento empleando protoplastos para una transformación mediada por polietilenglicol y otra metodología usando electroporación de conidias. Para el método de electroporación no se consiguieron resultados satisfactorios con los tratamientos evaluados. Se probaron diferentes voltajes y tiempos de exposición, sin mbargo no se obtuvo transformantes en ninguno de los casos, y debido a esto los esfuerzos se centraron en desarrollar una metodología basada en el uso de protoplastos. En este otro método alternativo se trabajó la formación de protoplastos a partir de un micelio joven. Se evaluaron diferentes factores como el tiempo de cultivo del micelio que fue establecido a 14 h, el tiempo de reacción enzimática que fue determinado a 90 min, así como las condiciones de recuperación y regeneración de protoplastos. Una vez definida la metodología de formación de protoplastos, se estableció un procedimiento para la trasformación génica mediado por polietilenglicol usando el plásmido integrativo pBF101_hph. En esta segunda etapa, se verificó que el uso de la forma linealizada del vector mejora la eficiencia de transformación comparado al uso de la forma circular. Además, se evaluaron dos procedimientos de selección, sin y con sobrecapa de agar (directa e indirecta), de los transformantes en un medio de cultivo conteniendo higromicina, estableciendo que la selección directa reduce el número de falsos positivos. De esta forma, como resultado de la investigación realizada, se presenta una metodología adecuada para la transformación de la cepa Aspergillus niger ATCC 10846 como una herramienta para su manipulación genética y para su estudio a nivel moleculares_PE
dc.description.abstractIn this study, two genetic transformation procedures were evaluated for Aspergillus niger, protoplast mediated transformation (PMT) and electroporation transformation. In electroporation, satisfactory results were not achieved with the evaluated treatments. Different voltages and exposure times were tested, however, no transformant was obtained in any of the cases, and due to that, our efforts were focused on developing a methodology based on the use of protoplasts. In PMT, protoplast formation from young mycelium was evaluated. Different factors were studied, such as the mycelium culture time, which was optimal at 14 h; the enzymatic reaction time, which was better at 90 min, as well as the recovery and regeneration conditions of the protoplasts. Once the protoplast formation methodology was defined, a procedure for polyethylene glycol-mediated genetic transformation was established using the integrative plasmid pBF101_hph. In this second stage, we found that using the linearized form of the vector improved the transformation efficiency compared to the use of the circular form. In addition, two selection procedures (direct and indirect) using hygromycin in the culture medium were evaluated, establishing that direct selection reduces the number of false positives. As a result of our work, an adequate methodology to transform protoplasts from the Aspergillus niger ATCC 10846 strain was developed, which could be used for its genetic manipulation and molecular-level studies.en_US
dc.formatapplication/pdfen_US
dc.language.isospaes_PE
dc.publisherUniversidad Nacional Agraria La Molinaes_PE
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccessen_US
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/*
dc.subjectAspergillus nigeres_PE
dc.subjectGenomases_PE
dc.subjectTransformación genéticaes_PE
dc.subjectFitomejoramientoes_PE
dc.subjectADNes_PE
dc.subjectGeneses_PE
dc.subjectMarcadores genéticoses_PE
dc.subjectSelecciónes_PE
dc.subjectPlantas transgénicases_PE
dc.subjectExperimentación en laboratorioes_PE
dc.subjectEvaluaciónes_PE
dc.subjectPerúes_PE
dc.titleOptimización de un sistema de transformación genética de Aspergillus niger como herramienta para su estudio molecular en biotecnologíaes_PE
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisen_US
dc.coverageLima. Perúes_PE
thesis.degree.disciplineBiologíaes_PE
thesis.degree.grantorUniversidad Nacional Agraria La Molina. Facultad de Cienciases_PE
thesis.degree.nameBiólogoes_PE
dc.subject.ocdehttps://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01es_PE
renati.author.dni73257497es_PE
dc.publisher.countryPEes_PE
dc.type.versioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersionen_US
renati.advisor.orcidhttps://orcid.org/0000-0001-8123-3559es_PE
renati.advisor.dni09753335es_PE
renati.typehttps://purl.org/pe-repo/renati/type#tesises_PE
renati.levelhttps://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesionales_PE
renati.discipline511206es_PE
renati.jurorEspejo Joya, Rosa Amelia
renati.jurorKitazono Sugahara, Ana Akemi
renati.jurorMeza Contreras, Víctor Juan


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